光敏感性实验方法建立及研究

　　光敏感性是在人皮肤反复接触实验物质并暴露于紫外线照射下，诱导免疫系统出现特异性光诱导反应，当再次接触实验物质并照射紫外线后，皮肤发生红斑、水肿、焦痂等特异性皮肤光激发反应。国外已经建立了多个光敏感性实验方法，比如Adjuvant-Strip法、Harber法、Jordan法等[1]，但直至目前，国内尚没有检验化妆品及其原料光敏感性的统一的方法标准。我们参考国内外方法资料[1-3]，尤其Adjuvant-Strip法[1]，建立了一套简便、实用的方法用于检测化妆品及原料的光敏感性。

　　1　材料与方法

　　1.1　受试物　液体受试物使用原液或稀释液，以适于临床评价的浓度为准。固体受试物充分研碎，以水或者其他溶剂充分湿润。必要时将溶剂做为对照，排除其对皮肤的刺激性影响。化妆品成品一般使用原霜或原液。阳性对照选用3,3',4',5-四氯水杨酰替苯胺。

　　1.2　实验动物　选择健康成年白化豚鼠，体重在300～350g之间。

　　1.3　UV光源　采用波长320～400nm之间的UVA或者UVA+B作为光源。

　　1.4　实验方法　实验前用辐射测量仪测定豚鼠背部照射区UV强度，选择6个照射点，计算平均值（mW/cm2）。照射剂量为10J/cm2，根据下列公式计算照射时间：照射时间（s）=照射剂量（10,000J/cm2）/ 光强度[J/（cm2.s）]

　　每次实验选择6只豚鼠，雌雄各半。

　　光致敏诱导阶段：①实验动物肩胛区剃毛约2cm×4cm大小，分别于剃毛区的四个角落皮内注射FCA乳剂和水混合物 0.1ml，（1:1 V/V，FCA乳剂/水或生理盐水）。②用透明胶带反复粘揭剃毛区注射点内侧部位，约5～6次后，皮肤出现轻度红斑。将实验物开放涂布于该位置（实验物0.1ml或者0.1g），30min后，紫外线照射，照射剂量为10J/cm2。③粘揭、涂药、照射，连续进行5天，每天一次。

　　光激发阶段：①光诱导处理完成3周后，实验动物背部皮肤全部剃毛。②实验物双侧对称涂布（0.05ml或0.05g/2cm×4cm），30min后，一侧紫外线照射，一侧遮盖保护。

　　光激发实验24、48h后，肉眼观察照射部位，按表1评分，得出实验结果。

　　2　实验结果

表1 光敏感实验皮肤反应评分表

表2 光敏感实验物光致敏强度

　　2.1　当受试组实验动物皮肤反应积分>1时，判定该受试物皮肤光致敏反应阳性，依据下述公式计算阳性率及致敏率，依据表2判定光致敏强度。

　　阳性率=阳性动物数/ 实验动物总数 ×100%致敏率=Σ（①+②）/ 实验动物总数 ×100%2.2　试验中应设立阴性、阳性对照组。阴性对照组于光致敏诱导阶段仅涂布溶剂作为对照，而光激发阶段涂布实验物。

　　2.3　如果光激发试验结果不能确定，应于第一次激发后一周，再次予以激发。对照组同步处理，观察结果。

　　3　讨论

　　随着化妆品应用日益广泛，为确保化妆品的光敏安全性，建立一套标准的光敏感试验方法，检测化妆品成品及原料的光敏感性的要求越来越强烈。

　　我们参照国际流行的Adjuvant-Strip法，并结合国内实际情况，建立了这一方法。在实验操作过程中，对实验动物的选择、喂养、动物房环境等都有严格的把握，同时选择波长320～400nm之间的UVA，或者UVA+UVB作为光源，尽量模仿自然日光环境。该实验方法的建立，为国内化妆品及原料的光敏感性检验提供了基础。

　　参考文献：

　　[1] Japanese Guidelines for Non-clinical Studies of Drugs Manual,compiled by the Evaluation Division, the pharmaceutical AffairsBureau, the Ministry of Health and Welfare （Japanese version） .

　　Yakuji Nippo, Ltd. 1997.

　　[2] 赵同刚。 化妆品卫生规范 [M]. 北京军事医学科学出版社，2007:115-117.

　　[3] 张丽霞，宋丽华，史勤俭。 光毒性试验方法研究 [J]. 环境与健康杂志， 2002, 19（1）:60-61.

　　关于作者：

　　作者单位： 1.中国医科大学第一附属医院皮肤科，沈阳 1100012.空军总医院皮肤科

　　作者简介： 单士军（1975- ），男，主治医师，博士在读，研究方向：皮肤光老化

　　通讯作者： 刘玮，E-mail: liuwei5811@yahoo.com.cn